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生物所发表新型分子克隆系统

作者:科技处 来源:科技处日期: 2020-01-19 点击:

  日前,生物所言普副研究员等人经过多年研究,开发了一种新型的标准化分子克隆技术──Nimble Cloning。该技术能将目标DNA通过一步反应直接克隆到环状目标载体。


  该技术近期以《Nimble Cloning: A Simple, Versatile, and Efficient System for Standardized Molecular Cloning》为题发表在国际期刊Frontiers in Bioengineering and Biotechnology(IF 5.1),生物所言普副研究员和周鹏研究员为该文通讯作者。(论文链接:https://doi.org/10.3389/fbioe.2019.00460

   

  DNA分子克隆技术是分子生物学研究的基础,其创新和发展直接推动着分子生物学的进步。目前使用的分子克隆方法有多种,各有优缺点,导致分子克隆领域尚未形成一种标准化的方法,且多为国外技术,试剂盒价格昂贵。


  Nimble Cloning技术集成了目前几种克隆技术的优点,并较好的解决了它们的不足之处。与现有分子克隆技术相比,Nimble Cloning具有以下优点:一是直接将DNA克隆到环状载体,避免了载体的线性化酶切和回收等步骤,不仅简化了实验操作,还提高了克隆效率。二是使用灵活,用途广泛。PCR产物和环状质粒上的DNA(入门克隆)均可克隆到目标载体,并且可用于单片段、多片段和多位点等多种形式的克隆。三是可灵活用于标准化克隆和无缝克隆。基因加带通用接头序列后可克隆到系统任何一个载体,形成一个标准化的克隆系统。如有不使用通用接头序列的无缝克隆要求,只需将目标基因与载体的重叠序列设计在通用接头的外围,通用接头可在克隆反应中消除,在不改变载体的情况下实现无缝克隆。


  为了方便Nimble Cloning技术的推广使用,言普等还构建了一系列配套的系统表达载体,包括原核表达、酵母双杂交、植物过表达、植物RNAi、植物亚细胞定位、植物BiFC、植物基因编辑、植物VIGS、哺乳动物表达载体等,初步形成了一个标准化的克隆系统,为基因功能研究提供了一个便利的技术平台。该套载体向科研人员开放共享,可免费索取使用(Email: yanpu@itbb.org.cn, QQ: 328995517)。


  据悉,该技术在发表论文前,已在中科院华南植物园、华南农业大学、华中农业大学、四川农业大学、东北林业大学、西北工业大学、扬州大学、海南大学等十多家科研单位使用,取得了良好的使用效果,有望成为分子克隆领域的标准系统。

   

  Nimble Cloning系统表达载体

  


   

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  Nimble Cloning系统在基因功能分析中的应用