日前，生物所言普副研究员等人经过多年研究，开发了一种新型的标准化分子克隆技术──Nimble Cloning。该技术能将目标DNA通过一步反应直接克隆到环状目标载体。

　　该技术近期以《Nimble Cloning: A Simple, Versatile, and Efficient System for Standardized Molecular Cloning》为题发表在国际期刊Frontiers in Bioengineering and Biotechnology（IF 5.1），生物所言普副研究员和周鹏研究员为该文通讯作者。（论文链接：https://doi.org/10.3389/fbioe.2019.00460）

　　DNA分子克隆技术是分子生物学研究的基础，其创新和发展直接推动着分子生物学的进步。目前使用的分子克隆方法有多种，各有优缺点，导致分子克隆领域尚未形成一种标准化的方法，且多为国外技术，试剂盒价格昂贵。

　　Nimble Cloning技术集成了目前几种克隆技术的优点，并较好的解决了它们的不足之处。与现有分子克隆技术相比，Nimble Cloning具有以下优点：一是直接将DNA克隆到环状载体，避免了载体的线性化酶切和回收等步骤，不仅简化了实验操作，还提高了克隆效率。二是使用灵活，用途广泛。PCR产物和环状质粒上的DNA（入门克隆）均可克隆到目标载体，并且可用于单片段、多片段和多位点等多种形式的克隆。三是可灵活用于标准化克隆和无缝克隆。基因加带通用接头序列后可克隆到系统任何一个载体，形成一个标准化的克隆系统。如有不使用通用接头序列的无缝克隆要求，只需将目标基因与载体的重叠序列设计在通用接头的外围，通用接头可在克隆反应中消除，在不改变载体的情况下实现无缝克隆。

　　为了方便Nimble Cloning技术的推广使用，言普等还构建了一系列配套的系统表达载体，包括原核表达、酵母双杂交、植物过表达、植物RNAi、植物亚细胞定位、植物BiFC、植物基因编辑、植物VIGS、哺乳动物表达载体等，初步形成了一个标准化的克隆系统，为基因功能研究提供了一个便利的技术平台。该套载体向科研人员开放共享，可免费索取使用（Email: yanpu@itbb.org.cn, QQ: 328995517）。

　　据悉，该技术在发表论文前，已在中科院华南植物园、华南农业大学、华中农业大学、四川农业大学、东北林业大学、西北工业大学、扬州大学、海南大学等十多家科研单位使用，取得了良好的使用效果，有望成为分子克隆领域的标准系统。

　　Nimble Cloning系统表达载体

　　Nimble Cloning系统在基因功能分析中的应用