近日，生物所周鹏研究团队在分子载体构建技术上取得重要进展，开发了两套用于快速构建植物hpRNA载体的新技术，可简单、高效地构建靶向各种植物基因（单个或多个）的hpRNA载体，为大规模的植物功能基因研究提供了一个高通量的平台。


　 　在植物分子生物学研究中，基因功能的研究占据重要地位。自从发现双链RNA能引发RNA干扰现象后，RNA干扰（RNAi）技术已经成为分析基因功能的 重要工具之一。随着RNAi技术在植物基因功能分析上的广泛应用，迫切需要一种高通量构建发夹RNA（hpRNA）表达载体的方法。周鹏研究团队对植物 hpRNA表达载体的构建进行了创新性研究，开发了两套用于快速构建植物hpRNA载体的新技术。第一套是基于套叠PCR，可通过一步法快速构建 hpRNA结构以及嵌合型hpRNA结构；第二套是基于Golden Gate克隆，可高通量地构建植物hpRNA载体。利用这两套技术构建了一系列hpRNA表达载体，并成功地在植物中干扰了目标基因的表达，包括同时干扰 两个基因的表达。


　　载体构建是分子生物学实验中的重要环节，其构建技术的创新性研发极大地推动分子生物学技木的不断进步。目前 使用的载体构建技术有常规的酶切连接法、重叠延伸PCR法、同源重组法等。常规的酶切连接法在多片段的克隆中费时费力，而以Gateway为代表的同源重 组法需购置昂贵的试剂。为解决这个问题，周鹏研究团队建立了一种快速和高效地进行质粒载体多位点突变和改造的新方法，实现了其它方法难以达到的复杂类型 （包括10kb以上大质粒）的载体改造；发明了一种模式化构建质粒载体的新方法，可灵活地选用各种遗传模块，并简单、高效地拼装成各种类型的新质粒载体。


　 　该套新技术一经问世，就被中国科学院、台湾中央研究院、北京大学、复旦大学等20多个国内知名院校及剑桥大学、宾夕法尼亚大学、基尔大学、北海道大学等 10多个国外知名院校关注并索取使用，取得了良好的应用效果。目前，生物所已与明日百傲（北京）科技有限公司合作研发该技术的配套产品（试剂盒）并进行商 业化推广和应用。